韓春雨

河北科技大學副教授韓春雨震驚全球?qū)W術(shù)界的新基因編輯技術(shù)NgAgo-gDNA,，正遭遇越來越多的質(zhì)疑。從5月2日他的論文發(fā)布在《自然-生物技術(shù)》網(wǎng)絡版之后,，到現(xiàn)在為止,，全球仍沒有一家實驗室對外宣布，能夠完全成功重復韓春雨的實驗?，F(xiàn)在已有多國科學家要求《自然-生物技術(shù)》介入調(diào)查,，并公開韓春雨實驗中的所有原始數(shù)據(jù)和實驗條件。

北京時間7月29日,，一度支持韓春雨的澳大利亞國立大學的基因?qū)W家Gaetan Burgio,，反戈一擊。他在Twitter上發(fā)布長文《我的NgAgo經(jīng)歷》,，否認了自己7月15日之前部分重復實驗時得出的結(jié)論,，表示并無嚴格意義上的證據(jù)顯示韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù)有基因編輯的跡象，并且要求韓春雨公開所有原始數(shù)據(jù)和實驗條件,。

韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù),，挑戰(zhàn)的是最為流行的基因編輯技術(shù)CRISPR-CAS9，論文剛一發(fā)表,，就引發(fā)了轟動,。基因編輯技術(shù)是指能夠讓人類對目標基因進行“編輯”,，實現(xiàn)對特定DNA片段的敲除,、加入等。目前CRISPR-CAS9是最為普遍的基因編輯技術(shù),，被稱為“基因魔剪”,。 5月2日，韓春雨課題組的論文《DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute》在《Nature Biotechnology》在線發(fā)表,。繞開時興的CRISPR-CAS9技術(shù),，課題組利用格氏嗜鹽堿桿菌（Natronobacterium gregoryi）的Argonaute核酸內(nèi)切酶，以DNA為介導進行基因組編輯,，簡稱NgAgo-gDNA,。

質(zhì)疑韓春雨的Gaetan Burgio在7月29日發(fā)布的長文中介紹了重復實驗的具體過程操作和結(jié)論，附帶了7張實驗結(jié)果圖,。

受精卵原核注射NgAgo之后,，基于囊胚的PCR結(jié)果。

對NgAgo注射過的受精卵PCR產(chǎn)物的T7核酸內(nèi)切酶檢測,。

當用高濃度5'磷酸化的ssDNA(25納克/微升)和NgAgo原核注射小鼠受精卵之后基于囊胚的PCR和電泳凝膠,。

對小鼠囊胚進行NgAgo、5’磷酸化ssDNA原核共注射之后獲得囊胚,，進行DNA提取,、PCR擴增和測序之后的一個典型測序結(jié)果。

微注射NgAgo的小鼠受精卵凝膠電泳,。

代表性的所有電泳膠的序列的Clustal比對,。Ank-1作為參考序列。

一個代表性測序色譜圖(使用反向引物測序),。

他表示：在多番嘗試,、試驗3個不同的細胞后，沒有發(fā)現(xiàn)嚴格意義上證明NgAgo發(fā)生基因編輯的證據(jù),；在他看來,，NgAgo酶需要加熱到50攝氏度才能有效，對37攝氏度下NgAgo內(nèi)切酶的活性表示質(zhì)疑,。

在長文中,，Gaetan Burgio表示,，“《自然生物技術(shù)》期刊應該要求韓春雨公開所有的原始數(shù)據(jù)和實驗條件”，并認為：“NgAgo的未來并不明朗,。”

Gaetan Burgio選擇了小鼠受精卵進行重復實驗,。因為他長期研究小鼠細胞，較為熟悉,，并在兩年半前,，用小鼠細胞，完成了他的首次CRISPR-Cas9基因編輯,。由于韓春雨的論文中使用的是人體細胞,，嚴格意義上來說，Gaetan Burgio和韓春雨所做的不是同一個實驗,。但由于小鼠和人體結(jié)構(gòu)相似,，一般認為人體細胞能完成的實驗也能在小鼠細胞上進行。

在Gaetan Burgio發(fā)文后不久,，來自西班牙高等科學委員會（CSIC）下設(shè)的國立生物技術(shù)中心（Centro Nacional de Biotecnologia）的科學家Lluis Montoliu轉(zhuǎn)發(fā)了該文,，并在Twitter上寫道：“CRISPR萬歲！??！CRISPR-Cas9系統(tǒng)會用上數(shù)百億萬年而不衰。難以擊垮,。”

據(jù)公開資料顯示,，2015年，Lluis Montoliu從非營利組織“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”（The International Society for Transgenic Technologies）卸任主席之位,。他的Twitter簡介顯示,，Lluis Montoliu的研究方向是哺乳動物的基因組，以及基于轉(zhuǎn)基因動物研究人類的罕見疾病,。

Lluis Montoliu在Twitter上透露,，在NgAgo之前，他們曾用大約2年時間,，試圖測試Ago家族中來自Thermus thermophiles嗜熱棲熱菌的酶TtAgo,，但同樣失敗。

隨后,，7月30日,，Lluis Montoliu更新博文稱，他已經(jīng)停止了所有關(guān)于NgAgo的項目,，同時“建議所有想做這件事人不要再浪費資源”,。

7月30日傍晚，方舟子在Twitter上貼出四張郵件截圖,，并附文稱“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會原主席Montoliu今天向協(xié)會會員發(fā)信,，建議停止驗證河北科大韓春雨實驗,，不要再浪費時間、金錢和人員,。針對該技術(shù)調(diào)查表明,，140個回復中,，只有一個（中國神經(jīng)所仇子龍,？）回答有效，73 個無效,，63 個在驗證,。”

圖片顯示，發(fā)件方為代表Lluis Montoliu的“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”,，郵件名為“對Ago的巨大失望：CRISPR萬歲,！”，發(fā)送時間為當?shù)貢r間7月29日上午9點49分,。郵件用加粗字體寫道：“（目前最重要的信息是）NgAgo在哺乳動物細胞的基因編輯中不起作用”,、“我建議所有人放棄涉及NgAgo的項目”。

方舟子所貼的郵件截圖,。

但Lluis Montoliu及其所處的“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”的言論,，引發(fā)了部分國內(nèi)科學家的不滿，其中包括中國科學院上海神經(jīng)科學研究所研究員仇子龍,。7月30日晚上,，他在實名認證的微博上質(zhì)疑“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”和Lluis Montoliu在領(lǐng)域內(nèi)的專業(yè)性。

仇子龍發(fā)文質(zhì)疑“國際轉(zhuǎn)基因技術(shù)協(xié)會”和Lluis Montoliu在領(lǐng)域內(nèi)的專業(yè)性,。

此前,，仇子龍被傳出重復實驗成功。7月20日,，科學網(wǎng)有博文稱仇子龍成功重復韓春雨的實驗,。但仇子龍本人在7月21日作出回應，表示實驗室仍在重復,，優(yōu)化各種條件,，目前的實驗結(jié)果距離韓春雨論文中的結(jié)果“相差甚遠”，并呼吁韓春雨提供“可重復NBT發(fā)表文章的NgAgo,，或者優(yōu)化的Ngago2.0,，smart版本等等”。

對NgAgo的質(zhì)疑聲自6月下旬開始就陸陸續(xù)續(xù),，韓春雨本人在百度貼吧上做出過一些回應,。

6月28日，他在對網(wǎng)友的回復中表示,，新系統(tǒng)剛出來都會“不好使”,，他也認同目前NgAgo系統(tǒng)不夠穩(wěn)定,，等2.0版本出來會找專門機構(gòu)免費發(fā)放。

面對質(zhì)疑,，他說,，“我敢把質(zhì)粒提交到addgen上，在協(xié)和講座發(fā)放質(zhì)粒,，對自己實驗的重復性還是很有膽氣的,。”韓春雨所說的“addgen”其實是Addgene，一家全球科學家質(zhì)粒共享的非盈利組織,。澎湃新聞（www.thepaper.cn）在Addgene官網(wǎng)上的確看到了韓春雨上傳的質(zhì)粒信息,。這些質(zhì)粒可供全球科學家直接用于重復韓春雨的實驗,。

7月2日,，在貼有方舟子質(zhì)疑原文的帖子中，韓春雨進行了較為詳細的回應,，強調(diào)NgAgo系統(tǒng)對污染特別敏感,，實驗時不要有寄生菌和支原體的污染，并對實驗環(huán)節(jié)做出技術(shù)性的建議,。

但7月2日之后,，韓春雨不再有新的回復。7月4日,，澎湃新聞（www.thepaper.cn）聯(lián)系上韓春雨,，他以“學校告訴我不要做任何回應”回絕。

有基因?qū)W家對澎湃新聞（www.thepaper.cn）表示,，如果最終《自然-生物技術(shù)》雜志在介入調(diào)查后也認為韓春雨的實驗是無效的,，那么他在5月2日發(fā)表的論文將會被《自然-生物技術(shù)》刪除。