原標題：三維光學超分辨成像：打開活細胞觀察新視野

中國科技網·科技日報訊（記者江耘）近日，浙江大學光電科學與工程學院劉旭教授和匡翠方教授課題組提出了一種新穎的光學成像技術——多角度干涉顯微鏡（MAIM）,，實現(xiàn)了對生物體內活細胞的多色,、長時程、高速和三維超分辨成像,，為微管,、內質網,、線粒體和細胞膜等亞細胞器的生物動力學分析提供了有力的研究工具。這項研究發(fā)表在知名期刊《自然·通訊》上,。

研究從諾貝爾獎開始

沈復在《浮生六記》中曾寫道,，余憶童稚時，能張目對日,，明察秋毫,，見藐小之物必細察其紋理，故時有物外之趣,。

到了現(xiàn)代社會,，要看清楚微觀世界，人們研究出了顯微鏡,。

為滿足紛繁復雜的實驗要求,，顯微鏡已經衍生出多個門類。以光學顯微鏡而言,，就有便于測定礦物光學常數(shù)的紅外顯微鏡,，用于鑒定物質細微結構光學性質的偏光顯微鏡，適合觀察活細胞,、進行定點光漂白實驗的雙光子熒光顯微鏡等,，它們在不同條件下各具優(yōu)勢，同時也有各自的技術局限,。

2014年的諾貝爾化學獎頒發(fā)給了超分辨熒光顯微技術的發(fā)明者,，這一技術利用特定的熒光染料實現(xiàn)光學的超分辨，突破衍射極限,，到達200納米以下的尺度,。科學家們可以通過光學顯微鏡,，看到細胞的精細結構,。

劉旭介紹，這項技術也有自己的弊端,，比如對熒光染料有特殊的擦除或者開關效應要求,，或需要獲取成百上千張原始圖像以重構超分辨圖像，因此成像時間較長,?！岸虅t十幾秒，長則幾十分鐘才能獲得一張超分辨圖像,，對于捕捉活細胞的運動瞬間仍舊困難重重,。”

劉旭還告訴記者,，現(xiàn)有超分辨顯微還有一個較大的瓶頸是,，在大多數(shù)情況下,，成像需要很強的激發(fā)光，這對細胞,，尤其是活細胞來說很不友好,，常常會將細胞殺死。而且強光照射也會導致熒光分子被快速漂白,，無法對活細胞進行長時程成像,。

因此，如何規(guī)避現(xiàn)有的瓶頸,，捕捉到活體狀態(tài)下亞細胞,、蛋白的運動，成為了課題組要攻克的難題,。

洞見新世界探尋生命原理

課題組提出了一種基于非共軸干涉系統(tǒng)的新型光學成像技術,。該方法結合了結構光照明顯微技術和多角度全內反射照明顯微技術，適用于任何熒光染料標記下的超分辨成像,。

常規(guī)光學顯微鏡的分辨率具有極限,，在可見光照明區(qū)域，橫向極限分辨率是成像光波長的一半(250-300納米),，軸向上500-600納米,。而結構光照明顯微技術只將橫向和軸向分辨率上提升了一倍。

課題組巧妙地把多角度全內反射照明引入到結構光照明顯微技術中,，實現(xiàn)了橫向分辨率~100納米,，軸向分辨率~40納米的三維超分辨成像。

在成像速度提升方面,，課題組通過利用變角度倏失場照明下的結構光成像，并結合計算成像模型,，使得三維成像速度大大提升,。同時由于所需光劑量低,，成像速度快,，減少了熒光漂白,，有利于長時程觀測,。對活細胞內線粒體和微管的成像結果如圖2所示,，揭示了它們的三維動態(tài)變化,。

“對細胞膜附近的細胞器進行三維快速超分辨成像,，可以為亞細胞研究提供可能,，揭示生命內在規(guī)律,?！睂Υ耍瑒⑿衽e了如下例子：過去進行藥物效果實驗,，大多只能通過整體的結果研究來了解藥物療效,，而無法研究藥物是如何穿透細胞膜,，如何運動以及如何相互作用的。未來就可通過MAIM顯微鏡,，了解這些動態(tài)過程,，從而大大提高各種研究的效率。

這一新穎的成像技術已經研制成儀器,，目前正在產業(yè)化過程中,。