第二步,,樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃的高溫滅活,,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染,、致病和繁殖能力,,使實(shí)驗(yàn)員在對(duì)樣本進(jìn)行檢測時(shí)相對(duì)安全,但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響,。
第三步,,進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。
第四步,,提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi),,就要上儀器了。提取的核酸加入擴(kuò)增試劑中,,通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng),,先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA,再以DNA為模版,對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增,,利用不同的溫度進(jìn)行變性,、退火和延伸,每個(gè)循環(huán)采集熒光值,,45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線,,用時(shí)約110分鐘,實(shí)驗(yàn)員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽性,。
第五步,,實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后,按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理,?!拔锪鳌痹谶@里就結(jié)束了。
檢測結(jié)果經(jīng)歷重重比對(duì)與復(fù)核
任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致檢測結(jié)果差錯(cuò),。因此,,為保障檢測的質(zhì)量,檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對(duì)與復(fù)核,。
據(jù)介紹,,檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開始了,樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核才能上崗,,樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān),每個(gè)動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行,,樣本采集完成后的護(hù)送工作也需按照嚴(yán)密的程序,,由專人專道配送到實(shí)驗(yàn)室。
在檢測過程中,,實(shí)驗(yàn)員始終保持謹(jǐn)慎的態(tài)度進(jìn)行每一次測試,,不錯(cuò)過任何一個(gè)可疑樣本,針對(duì)可疑樣本,,還會(huì)選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定,;其次,按照流程,,每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn),,均會(huì)隨機(jī)插入三個(gè)以上空白對(duì)照,針對(duì)陽性樣本還會(huì)進(jìn)行病毒基因的測序比對(duì),,以防止“假陽性”的出現(xiàn),。
檢測后,實(shí)驗(yàn)室還會(huì)定期隨機(jī)抽取檢測樣本送到第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測,,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析,,同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也會(huì)參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評(píng),保障檢測的準(zhǔn)確性,。