第二步,,樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃的高溫滅活,使病毒蛋白不再有生理活性,,失去感染,、致病和繁殖能力,使實(shí)驗(yàn)員在對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)相對(duì)安全,,但是病毒蛋白的基因序列并沒(méi)有受到影響,。
第三步,進(jìn)行開(kāi)蓋加樣和核酸提取,。
第四步,提取的核酸送到核酸檢測(cè)室內(nèi),,就要上儀器了,。提取的核酸加入擴(kuò)增試劑中,通過(guò)熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng),,先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA,,再以DNA為模版,對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增,,利用不同的溫度進(jìn)行變性,、退火和延伸,每個(gè)循環(huán)采集熒光值,,45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線,,用時(shí)約110分鐘,實(shí)驗(yàn)員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽(yáng)性,。
第五步,,實(shí)驗(yàn)過(guò)程產(chǎn)生的污物通過(guò)高壓滅菌后,按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理,?!拔锪鳌痹谶@里就結(jié)束了。
檢測(cè)結(jié)果經(jīng)歷重重比對(duì)與復(fù)核
任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果差錯(cuò),。因此,,為保障檢測(cè)的質(zhì)量,檢測(cè)結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對(duì)與復(fù)核,。
據(jù)介紹,,檢測(cè)質(zhì)量的保障措施在檢測(cè)前就已經(jīng)開(kāi)始了,樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核才能上崗,,樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān),,每個(gè)動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行,樣本采集完成后的護(hù)送工作也需按照嚴(yán)密的程序,,由專(zhuān)人專(zhuān)道配送到實(shí)驗(yàn)室,。
在檢測(cè)過(guò)程中,,實(shí)驗(yàn)員始終保持謹(jǐn)慎的態(tài)度進(jìn)行每一次測(cè)試,不錯(cuò)過(guò)任何一個(gè)可疑樣本,,針對(duì)可疑樣本,,還會(huì)選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定;其次,,按照流程,,每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn),均會(huì)隨機(jī)插入三個(gè)以上空白對(duì)照,,針對(duì)陽(yáng)性樣本還會(huì)進(jìn)行病毒基因的測(cè)序比對(duì),,以防止“假陽(yáng)性”的出現(xiàn)。
檢測(cè)后,,實(shí)驗(yàn)室還會(huì)定期隨機(jī)抽取檢測(cè)樣本送到第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè),,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析,同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也會(huì)參加衛(wèi)生主管部門(mén)和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評(píng),,保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性,。