韓春雨
河北科技大學(xué)副教授韓春雨震驚全球?qū)W術(shù)界的新基因編輯技術(shù)NgAgo-gDNA,正遭遇越來越多的質(zhì)疑,。從5月2日他的論文發(fā)布在《自然-生物技術(shù)》網(wǎng)絡(luò)版之后,,到現(xiàn)在為止,全球仍沒有一家實驗室對外宣布,,能夠完全成功重復(fù)韓春雨的實驗?,F(xiàn)在已有多國科學(xué)家要求《自然-生物技術(shù)》介入調(diào)查,,并公開韓春雨實驗中的所有原始數(shù)據(jù)和實驗條件,。
北京時間7月29日,一度支持韓春雨的澳大利亞國立大學(xué)的基因?qū)W家Gaetan Burgio,,反戈一擊,。他在Twitter上發(fā)布長文《我的NgAgo經(jīng)歷》,否認(rèn)了自己7月15日之前部分重復(fù)實驗時得出的結(jié)論,,表示并無嚴(yán)格意義上的證據(jù)顯示韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù)有基因編輯的跡象,,并且要求韓春雨公開所有原始數(shù)據(jù)和實驗條件,。
韓春雨的NgAgo-gDNA技術(shù),挑戰(zhàn)的是最為流行的基因編輯技術(shù)CRISPR-CAS9,,論文剛一發(fā)表,,就引發(fā)了轟動?;蚓庉嫾夹g(shù)是指能夠讓人類對目標(biāo)基因進(jìn)行“編輯”,,實現(xiàn)對特定DNA片段的敲除、加入等,。目前CRISPR-CAS9是最為普遍的基因編輯技術(shù),,被稱為“基因魔剪”。 5月2日,,韓春雨課題組的論文《DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute》在《Nature Biotechnology》在線發(fā)表,。繞開時興的CRISPR-CAS9技術(shù),課題組利用格氏嗜鹽堿桿菌(Natronobacterium gregoryi)的Argonaute核酸內(nèi)切酶,,以DNA為介導(dǎo)進(jìn)行基因組編輯,,簡稱NgAgo-gDNA。
質(zhì)疑韓春雨的Gaetan Burgio在7月29日發(fā)布的長文中介紹了重復(fù)實驗的具體過程操作和結(jié)論,,附帶了7張實驗結(jié)果圖,。
受精卵原核注射NgAgo之后,基于囊胚的PCR結(jié)果,。
對NgAgo注射過的受精卵PCR產(chǎn)物的T7核酸內(nèi)切酶檢測,。
當(dāng)用高濃度5'磷酸化的ssDNA(25納克/微升)和NgAgo原核注射小鼠受精卵之后基于囊胚的PCR和電泳凝膠。
對小鼠囊胚進(jìn)行NgAgo,、5’磷酸化ssDNA原核共注射之后獲得囊胚,,進(jìn)行DNA提取、PCR擴增和測序之后的一個典型測序結(jié)果,。
微注射NgAgo的小鼠受精卵凝膠電泳,。
代表性的所有電泳膠的序列的Clustal比對。Ank-1作為參考序列,。
一個代表性測序色譜圖(使用反向引物測序),。
他表示:在多番嘗試、試驗3個不同的細(xì)胞后,,沒有發(fā)現(xiàn)嚴(yán)格意義上證明NgAgo發(fā)生基因編輯的證據(jù),;在他看來,NgAgo酶需要加熱到50攝氏度才能有效,,對37攝氏度下NgAgo內(nèi)切酶的活性表示質(zhì)疑,。
在長文中,Gaetan Burgio表示,,“《自然生物技術(shù)》期刊應(yīng)該要求韓春雨公開所有的原始數(shù)據(jù)和實驗條件”,,并認(rèn)為:“NgAgo的未來并不明朗,。”