趙慶順以豬流行性腹瀉病毒(一種冠狀病毒,,來自活疫苗)為模型開展了高溫滅活對病毒可檢出量影響的研究,,結(jié)果表明:保存在普通等滲溶液(Hank’s液)中的樣品經(jīng)56℃孵育30分鐘,,導(dǎo)致樣品中可檢出的冠狀病毒模板減少一半,如果以92℃孵育5分鐘,,則可檢出的冠狀病毒模板損失96%以上,。
“理論上,不排除新冠病毒的目標(biāo)RNA片段在56℃以上高溫滅活中不易被降解的可能,?!壁w慶順坦言,“但我寧愿自己的判斷是錯(cuò)的,,也不希望因?yàn)槟硞€(gè)細(xì)節(jié)考慮不周而導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰性,。”
另外,,不同品牌的樣品保存液,,也會(huì)對檢測結(jié)果產(chǎn)生較大影響。趙慶順在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),,在56℃30分鐘條件下,,采用南京諾唯贊研發(fā)的R503保存液存放豬流行性腹瀉病毒樣品時(shí),病毒核酸的可檢出量是對照組(Hank’s液)檢出量的3倍,;而如果是92℃5分鐘滅活,,則檢出量是對照組的42倍,。
中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)主任委員王成彬教授在撰文回應(yīng)核酸檢測假陰性率較高現(xiàn)象時(shí)也指出,不同提取試劑對最后提取到的核酸數(shù)量和質(zhì)量可能存在差別,,從而直接影響檢測結(jié)果,。他建議,對于某些高度疑似病例,,或檢測結(jié)果難以確定的病例,,建議用2種以上試劑進(jìn)行檢測、驗(yàn)證,。
“假陰性意味著漏檢,,不僅會(huì)導(dǎo)致臨床中對疑似患者不能快速確診,而且會(huì)使漏檢者成為潛在的病毒傳染源,?!壁w慶順為此提出建議,一是盡量使用無核糖核酸酶污染的樣本采集管,,二是將標(biāo)本放置在可保護(hù)病毒核酸免受高溫滅活損壞的樣品保存液中,,從而確保樣品RNA從保存、運(yùn)輸?shù)礁邷販缁畹鹊玫饺瘫Wo(hù),,盡最大可能保證用于臨床檢測的核酸質(zhì)量,,減少病毒核酸可檢出模板在核酸提取前的人為損壞。